Συχνά προβλήματα όταν ο υπερηχητικός ομογενοποιητής σπάει το Escherichia coli

Το Ε. Coli εκφράζει ξένη πρωτεΐνη. Όταν υφίσταται κατεργασία με υπερήχους, εναιωρείται σε PBS που περιέχει 1% triton-X-100. Το υπερηχητικό αποτέλεσμα είναι καλύτερο. Η επίδραση του 1% triton-X-100 είναι ακόμα προφανής. Έργα, όπως το Streptomyces.

Βακτηριακή καθίζηση προσθέστε απευθείας το δείγμα 1buffer, προσθέστε 5ml μερκαπτοαιθανόλης, αναμίξτε, φυγοκεντρίστε, βράστε για 10min, βάλτε απ 'ευθείας φορτίο, κηλιδώστε και αποχρωματίστε τα εξής βήματα: τοποθετήστε την κόλλα στην κατάλληλη ποσότητα βαφής υγρού στον φούρνο μικροκυμάτων για 1min, το διάλυμα αντικαθίσταται από μεγάλη ποσότητα Το νερό μπορεί να μαγειρευτεί στο φούρνο μικροκυμάτων για 10 λεπτά.

Μετά την έκφραση της ανασυνδυασμένης πρωτεΐνης, τα κύτταρα διασπάστηκαν με υπερηχητικό κύμα, χρησιμοποιώντας λουτρό πάγου 400W και 2S σταμάτησε για 1S, αλλά δημιουργήθηκε μια μεγάλη ποσότητα αφρού σε σύντομο χρονικό διάστημα, γεγονός που επηρέασε την αποτελεσματικότητα σύνθλιψης. Τόσο τα pbs όσο και τα tris buffer ήταν τα ίδια και τελικά η σύνθλιψη ήταν ατελής. Αλλά η πρωτεΐνη-στόχο μου είναι σε αυτά τα αδιάσπαστα κύτταρα, πράγμα που με κάνει να μην μπορώ να βρω πειραματικά αποτελέσματα.

Επιτρέψτε μου να σας δώσω μια ανάλυση του γιατί αυτή η κατάσταση και η λύση.

1. Οι φυσαλίδες θα δημιουργηθούν επειδή η θέση του καθετήρα δεν είναι καλά τοποθετημένη, ο καθετήρας πρέπει να είναι κοντά στον πυθμένα, περίπου 1 εκατοστό (συνήθως είμαι 0,5 εκατοστά από το κάτω μέρος), το όργανο θα έχει διαφορετικά επίπεδα ισχύος, αλλά μπορείτε να παρατηρήσετε σελίδα, υπάρχουν διακυμάνσεις, αλλά μην είστε πολύ επιθετικοί.

2. Super 3S σταματά 10S, υπερήχων περίπου 20 φορές για να δείτε το αποτέλεσμα

3. Δώστε προσοχή στη θέση του κέρατος. Εάν δεν είστε σωστοί, θα πρέπει να το προσαρμόσετε εγκαίρως. Επιπλέον, από τη σκοπιά της συγκέντρωσης των βακτηρίων, προσπαθήστε να αυξήσετε τον όγκο κατά τη σύνθλιψη, η ισχύς δεν πρέπει να υπερβαίνει το 60%.

4. Δοκιμάστε 8S για το Super 8S. Για μερικές βακτηριακές πρωτεΐνες, η μέθοδος σας είναι δύσκολη στη διάχυση της θερμότητας, με αποτέλεσμα την μετουσίωση των πρωτεϊνών και τη δημιουργία φυσαλίδων. Είναι καλύτερο να σταματήσετε για λίγο περισσότερο. Αυτό είναι πιο συνηθισμένο με τη μορφή φορέων έγκλεισης.