Ομογενοποιητές Υπερήχων

Συνήθεις ερωτήσεις σχετικά με το σπασμένο κελιώνhttp://www.scientzbio.com/

Ποιες είναι οι προϋποθέσεις για την Υπερήχηση του Streptomyces (ακτινομύκητα);

Αναλυτικά: ακτινομύκητα ανήκουν στο ποσοστό γομφίου (G + C) (mol %) Gram-θετικά (Eubacteria) διακλάδωση του ομίλου της στο φυλογενετικό δέντρο προκαρυωτικό σύστημα, το οποίο έχει το μοριακό και βιολογικά χαρακτηριστικά μοναδικά σε προκαρυωτικούς. Ωστόσο, για τις διαφορετικές ομάδες, η χημική σύνθεση του κυτταρικού τοιχώματος ποικίλλει σε μεγάλο βαθμό.

Στον υπέρηχο του E. coli, 400W χρησιμοποιείται, και τη μέθοδο του σπασίματος 5s για 5s είναι αποτελεσματική, αλλά χρησιμοποιείται σε Streptomyces, και δεν έχει καμία επίδραση λόγω της διαφοράς στη σύνθεση του κυτταρικού τοιχώματος. Θεραπεία προ-νηματοποίηση Streptomyces (ακτινομύκητα) γενικά έχει ρυθμιστεί για μια ορισμένη τιμή συγκέντρωσης της σταγόνας του βακτηριακού εναιωρήματος. Οι συγκεκριμένες συνθήκες για την σύνθλιψη χρησιμοποιώντας το disruptor υπερήχων κυττάρων: συλλέγει τα βακτήρια στο διάλυμα 24 h πολιτισμού στο 5 000 r / min για 5 λεπτά να συλλέξει τα κύτταρα? πλύσιμο με pH 7.5 Na2HPO-buffer NaH2PO 3 φορές, και στη συνέχεια τα κύτταρα που διατυπώθηκαν σε βακτηριακή αναστολή 1:3 χρήση buffer. Τοποθετείται σε ένα μεγάλο πλαστικό δοκιμή σωληνάριο των 40 mL? Τοποθετήστε το μεγάλο πλαστικό σωλήνα δοκιμής σε ένα παγόλουτρο και φλερτ με ένα υπερήχων κυττάρων διαταράκτης (Ισχύς 200W, 1/2" καθετήρα, φλερτ για 30s, διαλείπουσα 30s)? σύνθλιψη λύση στο 12 000 r/min υποβάλλει σε φυγοκέντρωση σε υψηλή ταχύτητα για 30 min, συλλέγουν κυτταρικά υπολείμματα και υπερκείμενο υγρό. Κύτταρα πλύση μπορούν να πλυθούν επίσης μία φορά, με προ-ψυγμένο φυσιολογικό ορό ή Tris-HCl σε pH 8. Επιπλέον, η υπερηχητική δόση ποικίλλει σε μεγάλο βαθμό με το ποσό των δειγμάτων και τα βακτήρια. Η δύναμη μπορεί να είναι 400-600w, συνθλίβονται για 5s, σταμάτησε για 5s, παγόλουτρο, και η τελική συγκέντρωση του 1 mM PMSF προστίθεται. Για να προσδιορίσετε το κατάλληλο υπερήχων ένταση και συχνότητα, είναι απαραίτητο να ελέγξετε αν τα βακτήρια καταστρέφονται εντελώς ανά πάσα στιγμή.